產(chǎn)品描述

一站式鼠尾基因型快速鑒定試劑盒適用于從鼠尾、鼠耳、腳趾或其它組織快速提取基因組DNA，并進(jìn)行PCR擴(kuò)增，從而實(shí)現(xiàn)快速、便捷且準(zhǔn)確的小鼠基因型鑒定(genotyping)及基因組的相關(guān)分析。

本試劑盒可在10-15 min內(nèi)快速消化和提取鼠尾組織樣品的基因組DNA，有效簡化了鼠尾基因組DNA獲取過程。本試劑盒還提供了預(yù)配制的2X PCR Master Mix (Green)，內(nèi)含Taq DNA Polymerase，PCR Buffer，dNTP和上樣緩沖液，只需加入適量引物、模板和水即可進(jìn)行PCR擴(kuò)增。PCR結(jié)束后，產(chǎn)物可直接進(jìn)行電泳分析，方便快捷。

推薦組織用量

3~5mm2 小鼠尾尖 (2~3mm)

5~10mm2小鼠耳朵 (3~5mm)

1個小鼠腳趾

訂購信息

產(chǎn)品組分

運(yùn)輸與保存

藍(lán)冰運(yùn)輸。組分按照保存條件保存，有效期12個月。

使用方法

1.   基因組提取步驟：

(1) 向每個樣本中加入70 μL DNA extraction solution，確保組織浸沒在溶液中。

(2) 在95℃的金屬浴或水浴中裂解處理10-15 min。裂解完成后，組織在外觀上仍然保持完整，但足量的基因組DNA已成功釋放，不影響后續(xù)的PCR實(shí)驗。

(3) 裂解后，短暫離心去除管蓋內(nèi)壁的液滴，然后在室溫下靜置2 min。隨后加入70 μL終止液（Stop solution），輕輕混勻，終止裂解反應(yīng)。

(4) 12000 rpm離心2 min，取上清液作為PCR模板。上清液在消化后可在4℃保存一個月，或在-20℃下保存一年。

2.   PCR擴(kuò)增步驟：

(1) 將2X PCR Master Mix（Green）置于冰浴或冰盒內(nèi)，并準(zhǔn)備PCR反應(yīng)所需的引物、模板和水。

(2) 參考表1，在冰浴上配制PCR反應(yīng)體系。

(3) 使用移液器輕輕吹打或輕微漩渦混合（Vortex）以確保充分混勻。隨后，在室溫下短暫離心幾秒鐘，使液體集中于管底。

(4) 將配制好的PCR反應(yīng)體系放置在PCR儀中，啟動PCR反應(yīng)。

(5) 可參考表2設(shè)置PCR反應(yīng)程序參數(shù)。PCR反應(yīng)結(jié)束后，可直接進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳。

表1：PCR反應(yīng)體系

表2：PCR反應(yīng)程序設(shè)定

注意事項

1. 本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實(shí)驗研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。

2. PCR產(chǎn)物少或沒有條帶。引物設(shè)計不佳是最常見的問題，需合理優(yōu)化引物；在室溫下配置反應(yīng)體系易引發(fā)非特異性擴(kuò)增，建議在冰浴中進(jìn)行；退火溫度不當(dāng)可能影響結(jié)果，建議使用溫度梯度PCR儀優(yōu)化，或通過多次PCR反應(yīng)找到最佳溫度；延伸時間不足。建議每1 kb片段延伸1 min，難以擴(kuò)增的片段可延長至1.5-2 min。

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